TitinAb試劑盒在使用前,需將試劑盒內所有試劑平衡至室溫,嚴格按照說明書規(guī)定的操作步驟和時間進行實驗,避免試劑污染和交叉反應。樣本的采集和處理也至關重要,應遵循無菌操作原則,避免溶血、反復凍融等情況,以保證檢測結果的準確性。
TitinAb試劑盒測定步驟:
1.準備階段:
-試劑平衡:將試劑盒從冰箱中取出,室溫平衡20分鐘左右,使試劑的溫度與實驗環(huán)境一致。
-樣本準備:根據實驗需求,收集并處理樣本,如血清、血漿等,確保樣本質量符合實驗要求。
-工作液配制:按照說明書的要求,配制洗滌液、酶標抗體工作液等所需工作液。注意洗滌液如有結晶,需水浴加熱使其溶解后再使用。
2.加樣與孵育:
-加樣:在酶標包被板上設標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL(即樣本稀釋5倍)。然后迅速在各孔中加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體50μL,加蓋或覆膜,輕輕振蕩混勻。
-溫育:將包被板放入37℃水浴箱或恒溫箱中,溫育60分鐘。
3.洗滌與顯色:
-洗滌:棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置1分鐘,甩干,如此重復洗板5次。
-顯色:每孔加入底物溶液90μL,酶標板覆膜后置于37℃避光環(huán)境中反應25-30分鐘。
4.終止與測定:
-終止反應:每孔加入終止液50μL,終止反應。
-測定吸光度:在確保酶標板底無水滴及孔內無氣泡后,立即用酶標儀在450nm波長處測量各孔的OD值。
5.結果計算與判斷:
-繪制標準曲線:根據標準品的濃度和對應的OD值,繪制標準曲線。
-計算樣本濃度:將樣本的OD值代入標準曲線方程,計算出樣本中TitinAb的濃度。
-結果判斷:根據計算出的樣本濃度和說明書中的參考值范圍,判斷樣本是否為陽性或陰性。